Giới thiệu sản phẩm Bộ nhuộm Gram

20170805_081550

HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG BỘ THUỐC NHUỘM GRAM

Nguyên tắc

Do sự khác biệt về cấu trúc vách tế bào vi khuẩn nên vi khuẩn Gram (+) giữ được màu tím của phức hợp Gentian-iod không bị tẩy bởi alcohol. Trong khi đó, vi khuẩn Gram (-) không giữ được màu của phức hợp này sau khi tẩy bằng alcohol.

Thuốc thử được cung cấp

Thuốc thử

Thành phần

Số lượng

ĐK bảo quản

Nhuộm Gram Crystal Violet

100ml/chai x 1

Nhiệt độ phòng

Lugol

100ml/chai x 1

Nhiệt độ phòng

Alcohol 95%

100ml/chai x 1

Nhiệt độ phòng

Safranine

100ml/chai x 1

Nhiệt độ phòng

 Phương pháp thực hiện thử nghiệm

  1. Làm một phết bệnh phẩm hoặc vi khuẩn trên một lame sạch. Để khô tự nhiên và cố định bằng cách hơ nóng qua ngọn lửa của đèn cồn.
  2. Nhỏ vài giọt Crystal Violet cho phủ đều trên bề mặt phết nhuộm và để yên trong vòng 1 phút.
  3. Rửa nhanh bằng nước.
  4. Nhỏ vài giọt Lugol cho phủ đều trên bề mặt phết nhuộm và để yên trong vòng 1 phút.
  5. Rửa nhanh bằng nước.
  6. Tẩy màu bằng cách nghiêng lame và nhỏ từ từ alcohol lên phết nhuộm, khi giọt alcohol rời khỏi lame không có màu tím thì ngưng ngay.
  7. Rửa nhanh bằng nước.
  8. Nhỏ vài giọt Safranine cho phủ đều trên bề mặt phết nhuộm và để yên trong vòng 1 phút.
  9. Rửa nhanh bằng nước.
  10. Thấm khô phết nhuộm và quan sát dưới kính hiển vi.

Biện luận kết quả

  1. Vi khuẩn Gram (+) bắt màu tím và vi khuẩn Gram (-) màu hồng.
  1. Kết quả nhuộm Gram bao gồm: (1) tính chất Gram (+/-); (2) hình dạng vi khuẩn (cầu khuẩn, trực khuẩn); (3) cách sắp xếp (chuỗi, chùm, rời rạc…).

Lưu ý khi thực hiện nhuộm Gram

  1. Vi khuẩn Gram (+) có thể bị bắt màu hồng nếu: mầm cấy vi khuẩn quá già trên 24 giờ; dung dịch lugol không đạt; tẩy màu quá lâu; tẩy màu bằng alcohol acid.
  2. Vi khuẩn Gram (-) có thể bắt màu tím nếu: phết vi khuẩn quá dày; tẩy màu quá ngắn; alcohol tẩy màu bị pha loãng
  3. Sau khi phủ Crystal Violet, không rửa sạch màu thừa trên lame do vậy khi phủ lugol trên phết nhuộn thì màu Gram thừa sẽ bị tủa lại bám trên bề mặt phết nhuộm. Kết quả khi nhìn qua kính hiển vi sẽ thấy rất nhiều tinh thể màu Gram bám trên phết nhuộm làm lầm tưởng hình ảnh vi nấm.

420170805_081550